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L'agent spécial Leroy Jethro Gibbs, de la Section criminelle de la Gendarmerie maritime, dirige un groupe de personnes aux personnalités colorées qui enquête sur les crimes. Ceux-ci vont du meurtre et de l'espionnage au terrorisme, et sont reliés de manière assurée au personnel du corps de la Marine. L'équipe est composée d'Anthony DiNozzo, un ex-inspecteur plein d'esprit spécialisé en homicides, d'Abby Sciuto, l'excentrique spécialiste d'enquête en technique de laboratoire, de Timothy McGee, brillant lorsqu'inquiet, et de Ziva David, ex-officier de liaison du Mossad. Le Dr Donald "Ducky" Mallard contribue à la résolution de cas grâce à sa grande expérience dans le domaine de la médecine légale.
À Las Vegas, un groupe d'experts scientifiques de la police recueille des indices sur les scènes de crime pour résoudre des enquêtes complexes. Un temps conduite par Gil Grissom, un entomologiste qui garde toujours son sang-froid, l'équipe enchaîne les affaires délicates : meurtres sanglants, viols, disparitions, leur taux d'efficacité est impressionnant. D.B. Russell, qui prend la suite des opérations après le départ de Gil Grissom et l'intérim de Raymond Langston, tente de maintenir la réputation d'excellence du service.
Pilote de l'US Navy, le lieutenant Harmon Rabb est rattaché au JAG (Juge-Avocat Général) à la suite d'un accident d'avion. Désormais avocat, il est chargé de gérer les conflits judiciaires internes à la Navy.
Agent du FBI, Don Eppes, trouve une aide précieuse auprès de son frère, Charlie, mathématicien de génie, pour résoudre les enquêtes les plus délicates. Le jeune homme utilise en effet les nombres pour analyser les crimes, révéler les tendances et tenter ainsi de prévoir le comportement.
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